先前用α----酮-测试的单位点突变体没有裂解 (±) -或 ----酮和的c-c 键。转向三重tkgst突变体---（hlhxdx 或 lx，或 fx，或 lx 或 lx），将先前确定的位置结合起来进行逆向反应（使用脂肪族酮酸作为供体和脂肪醛作为受体形成α----酮）。在大肠bl菌株中表达---，使用粗提物针对α----酮和进行筛选，并与型tkgst进行比较。根据产物或的斑点强度， 紫外线吸收剂312 厂家批发，通过薄层色谱法(tlc)估计每个---中的阳性百分比。
为了证明这种方法在合成化学中的潜在应用，选择(+)-estrone作为目标进行合成放大。按照corey以及list---的路线，合成得到torgov---的，-二酮后，在优化条件下对其进行催---化定量得到---酮（ee ，?dr :），然后经prins环化脱水和ibx氧化得到二烯u，再通过两步转化得到(+)-estrone。（图片来源：chem. sci.）对反应中只有一个---被还原的现象产生好奇。当用剧烈的条件时，也难以得到二醇（scheme ，eq. ）。
单个tkgst突变体di、lf、fi和li 在大肠 bl菌株中表达并进行纯化。将tkgst突变体与型tkgst对(s)----酮-的活性进行了比较（chart ）。(s)-，-trihydroxybutan--one (l-erythrulose，) 是型tk的非磷酸化底物之一，被选为对照。型和突变体对表现出的活性，除了di，它是被脂肪链取代的极性残基。非极性残基ile代替asp显着降低酶的活性，可能是由于缺乏与的c的---的相互作用。脂肪链对其他非极性残基的突变对活性没有影响。
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