与gly相比，代替his的非极性ala或val残基（hlhali 和 hlhvli）具有较低的活性，因为它们具有较高的空间位阻，这阻碍了的非极性头部与 hl 的相互作用。与 gly 相比，极性和或带电的ser和glu代替 h (hlheli) 也导致较低的活性，这可以通过ser的极性侧链和与d冲突的glu的负电荷来解释，这种环境使的非极性头部朝向hl的位置不稳定。 规模制备具有脂肪族 α----酮裂解活性的tkgst 突变体随后在---醛存在下对和裂解反应进行了制备规模的研究。
值得注意的是，芳基和取代的烯基硼酸（y，z）均能以％和％的收率得到相应的α----烯酮，从而广泛扩展了产物范围。图. 芳基硼酸底物范围α----炔基酮是合成天然产物和分子重要的中间体。然而，此类α----酮的合成仍然面临重大挑战，通常需要多个步骤才能合成到这类骨架的化合物。因此设计了炔---三---盐的passerini型反应，
用脂肪族α----酮-筛选tkgst突变体库为了确定tkgst突变体（酶裂解物或纯化酶）对脂肪族α----酮-裂解的比活性， 紫外线吸收剂1164品牌---，通过分光光度法在 nm 处通过消耗还原形式的烟------ (nadh) 并使用酵母---脱氢酶 (adh) 作为辅助酶来检测醛 – 的释放。该方法通过移动tkgst平衡来连续测量tk的初始速度。tk作为转移酶，整个过程需要醛作为受体底物，受体的缺失会---降低 tkgst活性。磷酸化醛糖、d-核糖--磷酸 (d-rp)、戊糖磷酸途径中的tk受体或 d-赤藓糖是 tk的非磷酸化受体之一（方案）。
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