由于tkgst d结构未知,所以以tkban的x射线晶体结构为模板构建了包含其磷酸化受体醛糖 d-erythrose--phosphate (ep)的tkgst活性位点袋模型,该模型与相同微生物物种的具有高同一性。为提高tkgst对(s)-,-二---酮-的裂解活性,分别针对残基leu、leu、phe和asp进行了研究。对这些位置的ssm表明,di、lf、fi和li是为底物结合提供疏水环境的突变体(表)。为了确定提高tkgst活性以裂解脂肪族-或 ----酮或的合理位置,基于先前发现的位置来增加tkgst活性以形成相同的以酸类似物作为供体,脂肪醛作为受体的脂肪族α----酮。
通过亲和色谱纯化所有候选物,并使用前面描述的分光光度测定法确定它们对的比活性(chart )。虽然型tkgst对没有表现出活性,但与hlhs 相比,光稳定吸收剂3638哪里可以买,包含li的所有突变体都具有更高的活性,表明该突变对的c-c键切割提供了协同效应。结果(chart )表明,用非极性残基如gly (hlhgli)代替his 显着提高了活性。gly和其他两个脂肪族残基提供的疏水环境有利于稳定的非极性头部()(图)。
在剧烈的条件下,产物a也未能产生二醇(eq. );并且在另一种对映体配体的条件下,也未发生该转化(eq. )。两种催化剂对映体的手性袋与---酮似乎并不相容。当用nabh还原a时,仅定量得到手性反式二醇;而将保护---后,在相同条件下用nabh还原该酮仅得到顺式二醇(eq. )。其合理的解释可能是形成硼酸酯后进行分子内氢迁移,这可能是硼酸酯发生酯交换的结果。 ?(图片来源:chem. sci.)
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