发布单位:上海同金化工有限公司 发布时间:2022-5-18
先前研究表明,用作供体底物的酮糖可以被酮酸---酸(hpa) 取代,通过释放---使反应不可逆。因此,tk似乎是一种---的酶,用于不对称合成α----酮(方案)。当hpa作为供体时,tk对非磷酸化短碳链α----醛(c–c)表现出活性。此外,tk优先接受(r)----醛,产生 (s, r)α----酮。发现并表征了来自嗜热脂肪地芽孢 (tkgst)的个热稳定tk,在高温下表现出高稳定性和对异常反应条件的---性。使用合理的诱变方法将---化或非---化醛作为受体 (,) 和脂肪族 α-酮酸作为供体,提高和扩大了 tkgst 底物特---及其对映体偏好,确认了工程化的tkgst,其能够促进了脂肪族受体和供体底物组合的脂肪族α----酮 (c-c) 的合成。
用脂肪族α----酮-筛选tkgst突变体库为了确定tkgst突变体(酶裂解物或纯化酶)对脂肪族α----酮-裂解的比活性,通过分光光度法在 nm 处通过消耗还原形式的烟------ (nadh) 并使用酵母---脱氢酶 (adh) 作为辅助酶来检测醛 – 的释放。该方法通过移动tkgst平衡来连续测量tk的初始速度。tk作为转移酶,整个过程需要醛作为受体底物,受体的缺失会---降低 tkgst活性。磷酸化醛糖、d-核糖--磷酸 (d-rp)、戊糖磷酸途径中的tk受体或 d-赤藓糖是 tk的非磷酸化受体之一(方案)。